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產(chǎn)品型號(hào):
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
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更新時(shí)間:2022-10-13
簡(jiǎn)要描述:
禽.流感病毒H5亞型檢測(cè)試劑盒(PCR法)應(yīng)用RT-PCR熒光探針法,快速、準(zhǔn)確地定性檢測(cè)具流感癥狀的人群或禽類動(dòng)物的唾液或分泌物等樣本中的H5亞型禽.流感病毒核酸,適用于該亞型病毒的檢測(cè)、輔助診斷和流行病學(xué)調(diào)查等。
禽流.感病毒H5亞型檢測(cè)試劑盒(PCR法)
【產(chǎn)品概述】
禽流.感病毒H5亞型屬于高致病性禽.流感病毒,對(duì)禽類危害巨大,甚至?xí)腥救祟?,如H5N1禽.流感為衛(wèi)生部傳染病防治法中的法定傳染病,屬人感染高致病性禽.流感。
禽流.感病毒H5亞型檢測(cè)試劑盒(PCR法)應(yīng)用RT-PCR熒光探針法,快速、準(zhǔn)確地定性檢測(cè)具流感癥狀的人群或禽類動(dòng)物的唾液或分泌物等樣本中的H5亞型禽.流感病毒核酸,適用于該亞型病毒的檢測(cè)、輔助診斷和流行病學(xué)調(diào)查等。
【試劑盒組成】
組成成份 | 包裝規(guī)格 |
H5 RT-PCR反應(yīng)液 | 475 μl |
RT-PCR酶 | 25 μl |
H5 陽(yáng)性質(zhì)控品 | 50 μl |
陰性質(zhì)控品 | 50 μl |
【儲(chǔ)存條件及有效期】
-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融,有效期6個(gè)月。
【禽流.感病毒H5亞型核酸熒光PCR檢測(cè)試劑盒適用儀器】
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運(yùn)輸】
u 樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
u 存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長(zhǎng)期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次);
u 運(yùn)輸:采用冰盒加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
【自備試劑】
核酸提.取試劑,如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒,也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
【 禽流.感病毒H5亞型檢測(cè)試劑盒(PCR法)使用方法】
注:所有試劑使用前需*解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等,具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說明書;陽(yáng)性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))
取N個(gè)(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽(yáng)性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入H5 RT-PCR反應(yīng)液19 μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每人份用量計(jì)算N+1份H5 RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)
組分 | 每人份用量 |
H5 RT-PCR反應(yīng)液 | 19 μl |
RT-PCR酶 | 1 μl |
將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
3. 加樣(樣本處理區(qū))
在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
* 注意事項(xiàng):建議加樣順序是陰性質(zhì)控品、待檢樣本、陽(yáng)性質(zhì)控品。
4. PCR擴(kuò)增(擴(kuò)增區(qū))
1) 儀器設(shè)置(以ABI Prism 7500為例)
將PCR反應(yīng)管放入PCR儀內(nèi),按照對(duì)應(yīng)順序設(shè)置陰性質(zhì)控品(NTC)、陽(yáng)性質(zhì)控品(Standard)及待檢樣本(Unknown)。Reporter Dye為FAM,Quencher Dye為None,參比染料(Passive Reference)為 None。
1) 擴(kuò)增程序
50℃ 10min
95℃ 3min
95℃ 10sec
60℃ 1min
60℃采集熒光信號(hào),反應(yīng)體系為25 μl。
禽流.感病毒H5亞型檢測(cè)試劑盒(PCR法)結(jié)果分析條件設(shè)定
u 基線(Baseline)設(shè)定:應(yīng)選擇該次實(shí)驗(yàn)指數(shù)擴(kuò)增前所有樣本熒光信號(hào)比較穩(wěn)定的一段區(qū)域(所有樣本熒光信號(hào)無較大波動(dòng)),起始點(diǎn)(Start)應(yīng)避開熒光采集起始階段的信號(hào)波動(dòng),終止點(diǎn)(End)應(yīng)比早出現(xiàn)指數(shù)擴(kuò)增的樣本Ct值減少1~3個(gè)循環(huán),建議基線設(shè)為6~15。
u 閾值(Threshold)設(shè)定:將閾值線設(shè)定在剛好超過正常陰性質(zhì)控品擴(kuò)增曲線的*點(diǎn)。
【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】
1. 陰性質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性,無指數(shù)擴(kuò)增期,Ct=40或無Ct;
2. 陽(yáng)性質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性,有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期,Ct值應(yīng)小于等于35;
3. 以上要求需在一次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)滿足,否則該次實(shí)驗(yàn)視為無效。
【 禽流.感病毒H5亞型檢測(cè)試劑盒(PCR法)結(jié)果判斷】
1. 陽(yáng)性:有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期,且Ct<38;
2. 可疑:有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期,且38≤Ct<40,此時(shí)樣本為可疑樣本;對(duì)于可疑樣本建議復(fù)核一次,若復(fù)核結(jié)果Ct<40且有指數(shù)擴(kuò)增期,則判定為陽(yáng)性,否則判定為陰性;
3. 陰性:無指數(shù)擴(kuò)增期,Ct=40或無Ct值均判定為陰性樣本。
【對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1. 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染、試劑污染、樣品交叉污染會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果;
2. 試劑運(yùn)輸、保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,可能會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
【 禽流.感病毒H5亞型檢測(cè)試劑盒(PCR法)使用注意事項(xiàng)】
1. 有關(guān)實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范請(qǐng)嚴(yán)格按照行業(yè)行政主管部門頒布的有關(guān)基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。
2. 本試劑盒僅用于體外檢測(cè)。
3. 實(shí)驗(yàn)請(qǐng)嚴(yán)格分區(qū)操作:
第1區(qū):PCR前準(zhǔn)備區(qū) — 準(zhǔn)備擴(kuò)增所需試劑;
第二區(qū):樣本處理區(qū) — 待測(cè)樣本和對(duì)照品處理;
第三區(qū):檢測(cè)區(qū) — PCR擴(kuò)增檢測(cè)。
4. 各區(qū)物品均為,不得交叉使用,避免污染,實(shí)驗(yàn)后即請(qǐng)清潔工作臺(tái);
5. 試劑盒內(nèi)各試劑使用前,充分融化后請(qǐng)稍事離心。
6. 在-20℃保存的樣本裂解產(chǎn)物,應(yīng)在加樣前置室溫解凍,作短暫離心后使用。
7. 分裝有反應(yīng)液的檢測(cè)板或裝入密實(shí)袋內(nèi)再轉(zhuǎn)移至樣本區(qū)。
8. 加樣時(shí)應(yīng)使樣品*落入反應(yīng)液中,不應(yīng)有樣品粘附于管壁上,加樣后應(yīng)盡快封上封板膜。
9. 擴(kuò)增完畢立即取出檢測(cè)板,密封在塑料袋內(nèi),丟棄于地點(diǎn)。
10. 反應(yīng)液分裝時(shí)應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡,上機(jī)前注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊,以免熒光物質(zhì)泄露污染儀器。
11. 實(shí)驗(yàn)中用過的吸頭請(qǐng)直接打入盛有1%次氯酸鈉的廢物缸內(nèi),并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。
12. 工作臺(tái)及各物品定期用1%次氯酸鈉、75%酒精或紫外燈進(jìn)行消毒。
13. 建議使用離心管和吸頭一覽表